從提取蛋白質(zhì)自身角度考慮,ripa裂解物破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),,即破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),,使抗原決定簇充分暴露,有利于檢測,;
從試劑盒本身的角度考慮,,以雙抗體夾心法為例,提取的蛋白質(zhì)中含有ripa降解液,,放入裝在包里的平板中時(shí),,放入平板中的抗體也同樣會(huì)發(fā)生降解作用(如sds ),其特異性
萃取目前一般采用冷凍等電-離子交換法,。 發(fā)酵液在等電罐中用冷凍鹽水緩慢攪拌冷卻降溫至5,,用硫酸調(diào)節(jié)Ph為3.22 (等電點(diǎn)); 沉淀8h后,,沉淀經(jīng)離心分離分離為粗谷氨酸,; 母液和上層洗液調(diào)合后,更換上離子交換樹脂,,用氨水洗脫,。
引入前http(/10000.com) /上層清液回柱,后http(/10000.com) /和作為洗脫液,提高h(yuǎn)ttp(///10000.com) 緩慢加入純堿溶液中和至6.2~6.4,,控制中和液濃度為相對(duì)密度1.17~1.18(21~2b),。
將中和液降溫至50以下,加入適量硫化鈉溶液去除鐵,; 然后用粗谷氨酸回6.2~6.4,,升溫至60,加入粉末活性炭,,攪拌30分鐘后送入壓濾機(jī)過濾,。
濾液經(jīng)顆粒活性炭柱二次脫色得到澄清液,; 清液放入真空煮鍋在60~70蒸發(fā)濃縮至相對(duì)密度1.28(31.5084 ),,加入0.3 )6~0.542mm晶種后,繼續(xù)蒸發(fā)蒸發(fā)結(jié)晶,,其間需要熱水殺死結(jié)晶,,補(bǔ)充一定量的清液。
加入物料后,,經(jīng)培養(yǎng)槽,離心得到結(jié)晶味精,,母液或脫色后蒸發(fā)結(jié)晶,,精制收率可達(dá)理論量的92%。
也稱為速度,,具有離心分離,分離沉降系數(shù)比較接近的物質(zhì)的方法,;
原理:不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí),,一定離心力作用下顆粒分別以一定速度沉降,在密度梯度不同的區(qū)域形成區(qū)帶的方法,。
介質(zhì)的梯度應(yīng)預(yù)先形成,,介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于所有樣品粒子的密度。 常用的是蔗糖、甘油,;
濃度梯度液的配制采用梯度混合器,,形成從噴嘴向管底逐級(jí)上升的密度梯度。
密度離心法:液體離心時(shí),,其密度隨轉(zhuǎn)軸距離增加,。 堿基GC對(duì)雙鏈DN段密度高,利用精密的密度梯度超速技術(shù),,可以使切割合適片段的不同DNA按密度大小分布,。 并與某些放射性標(biāo)記的mRNA雜交檢測,分離相應(yīng)基因,。
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